Разработка рекомбинантных плазмидных ДНК, кодирующих кроветворные ростовые факторы SCF, G-CSF и FLT-3L и исследование их влияния на гематологические показатели мышей -2019 -Том 59, № 5 -Архив выпусков

Архив выпусков → 2019 → Том 59, № 5 → стр. 503-515

Статья

Разработка рекомбинантных плазмидных ДНК, кодирующих кроветворные ростовые факторы SCF, G-CSF и FLT-3L и исследование их влияния на гематологические показатели мышей

Власова О.А.¹, Кравцов И.С.¹, Багнаев И.В.¹, Ковшарь Э.А.¹, Круглова А.А.¹, Никифоров А.С.², Свентицкая А.М.²

¹ Научный центр “Сигнал”, Москва, Россия ¹ Государственный научно-исследовательский испытательный институт военной медицины МО РФ, Санкт-Петербург, Россия

Аннотация

Поиск лекарственных средств, эффективных при костномозговой форме острой лучевой болезни, а также для профилактики осложнений химиолучевой терапии онкобольных, является одной из важных проблем радиационной биологии и медицины. В данной работе исследована перспективность генно-терапевтического подхода для стимуляции созревания и выхода лейкоцитарных клеток в кровоток. Получены три рекомбинантные плазмидные ДНК (пДНК), кодирующие кроветворные ростовые факторы мыши – SCF, G-CSF и FLT-3L. В экспериментах in vitro показана их экспрессия на уровне 5.2, 2.2 и 8.2 мкг с эффективностью секреции – 75.6, 99.1 и 88.7% соответственно. Однократное введение аутбредным белым мышам комбинации из трех пДНК в сочетании с электропорацией обеспечило статистически достоверное по отношению к значениям контрольной группы увеличение, с максимумом на 7-е сутки, общего количества лейкоцитов в 2.6 раза (до 22.2 × 10⁹/л), гранулоцитов в 4.5 раза (до 16.5 × 10⁹/л) и моноцитов в 2.8 раза (до 2.3 × 10⁹/л). Исследована кинетика экспрессии генов трех цитокинов in vivo. Статистически значимый подъем уровня цитокинов в крови мышей отмечался в интервале от 6 ч до 3 сут после однократного введения пДНК и сохранялся в течение 14 дней. Полученные результаты подтверждают перспективность генно-терапевтического подхода для стимуляции системы кроветворения, что может быть востребовано для лечения острой лучевой болезни и мобилизации гемопоэтических стволовых клеток для пациентов, которым назначена высокодозная химиолучевая терапия с трансплантацией аутологичных гемопоэтических клеток.

Ключевые слова

плазмидная днк, кроветворение, генная терапия, электропорация, фактор стволовых клеток, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, лиганд FMS-подобной тирозинкиназы-3, костномозговой синдром, острая лучевая болезнь, лейкоциты, мобилизация гемопоэтически